Proteínas recombinantes monobiotiniladas

En Rekom Biotech hemos desarrollado una línea de proteínas monobiotiniladas, ofreciendo algunas de las referencias de nuestro catálogo con una biotina en su extremo C-terminal. Esta molécula permite la unión específica de las proteínas biotiniladas a la estreptavidina.

Nuestras proteínas monobiotiniladas están unidas a un BCCP-tag en el extremo C-terminal, con un residuo de lisina que es biotinilado enzimáticamente por la biotina ligasa BirA de E. coli. Esta técnica de marcado de un solo punto tiene muchas ventajas para los ensayos de unión más comunes:

  • La biotinilación solo ocurre en el residuo de lisina del BCCP tag.
  • No hay interferencia con las uniones de la proteína objetivo.
  • La orientación de las proteínas es uniforme cuando se inmoviliza sobre una superficie recubierta de estreptavidina, como las nanopartículas.

Echa un vistazo a nuestras proteínas monobiotiniladas y no dudes en ponerte en contacto con nosotros si necesitas cualquier cosa.

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ENFERMEDAD/ALERGIA NOMBRE REFERENCIAS DESCRIPCIÓN DETALLES

Babesiosis (o piroplasmosis)

BcMSA1
RAG0020BIOT (B. canis, biotinilado)
Antígeno de la superficie del Merozoito

Chagas / Trypanosoma cruzi

ChimChagas3
RAG0096BIOT (biotinilado, quimera)
Antígeno quimérico recombinante multi-epítopo para Chagas

Herpes oral / Virus del herpes simplex tipo 1 (VHS-1)

gG1
RAG0017BIOT (biotinilado) Nuevo
Glicoproteína G madura (gG-1)

Infección por Citomegalovirus (CMV)

ChimCMV1
RAG0109BIOT (biotinilado, quimera)
Antígeno quimérico recombinante multi-epítopo para CMV
ChimCMV2
RAG0110BIOT (biotinilado, quimera)
Antígeno quimérico recombinante multi-epítopo para CMV
pp52
RAG0090BIOT (biotinilado)
Subunidad procesiva de la ADN polimerasa

Infección por el virus de Epstein-Barr (VEB)

p18
RAG0049BIOT (biotinilado)
Antígeno de la cápside del virus

Leishmaniasis / Leishmania infantum

K39
RAG0061BIOT (biotinilado)
Antígeno correspondiente la kinesina del parásito

Neosporosis / Neospora caninum

NcGRA7
RAG0024BIOT (biotinilado)
Antígeno GRA7 presente en los gránulos densos

Phleum pratense (Polen de gramíneas)

Phl p 5a
RAL0003BIOT (biotinilado)
Desconocido

Sífilis / Treponema pallidum

ChimSyphilis1
RAG0046BIOT (biotinilado, quimera)
Antígeno quimérico recombinante multi-epítopo para Treponema pallidum
ChimSyphilis2
RAG0064BIOT (biotinilado, quimera)
Antígeno quimérico recombinante multi-epítopo para Treponema pallidum
Tpp15
RAG0009BIOT (biotinilado)
Lipoproteína de membrana
Tpp17
RAG0008BIOT (biotinilado)
Lipoproteína de membrana
Tpp47
RAG0010BIOT (biotinilado)
Lipoproteína de membrana

Síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) / Virus de la inmunodeficiencia humana (VIH)

p24
RAG0057BIOT (biotinilado)
Antígeno de la cápside del virus

Triticum aestivum (Trigo)

Tri a 19
RAL0053BIOT (biotinilado)
Omega-5 gliadina, proteína almacenadora de semillas

Sistemas convencionales de conjugación

Proteína monobiotinilada
Figura 1. Proteína monobiotinilada

Un antígeno conjugado puede ser una solución útil para varios problemas que pueden surgir durante el desarrollo de una nueva prueba IVD. Un problema común causado por la mayoría de las superficies es la desnaturalización de las proteínas debido a su alta hidrofobicidad superficial.

Además, los eventos de unión pueden verse afectados por la posición de la superficie y las moléculas del sensor, lo que podría causar un mayor impacto estérico. Además, colocar las moléculas en una orientación específica podría mejorar la estabilidad de las proteínas unidas y hacer que el ensayo sea más sensible al exponer sus regiones antigénicas.

Los métodos tradicionales de conjugación son efectivos para los anticuerpos, pero es posible que no brinden resultados consistentes para los antígenos con estructuras menos establecidas. Esto puede explicar por qué Los ELISA del tipo sándwich de doble antígeno (DAgS) no se usan tan ampliamente para detectar anticuerpos en comparación con ELISA.

Para evitar comprometer la estructura antigénica y la sensibilidad de los DAS-ELISA debido a la conjugación química convencional, la solución ideal es utilizar proteínas monobiotiniladas.

¿Por qué usar nuestras proteínas monobiotiniladas?

La unión extremadamente específica y de alta afinidad entre la biotina y la avidina y/o estreptavidina (Kd ≈ 10-14M) da lugar a sistemas de detección de alta sensibilidad. Una ventaja clara es que, con sólo una estreptavidina conjugada con peroxidasa, podemos obtener conjugados complejos de todas nuestras referencias sin necesidad de peroxidar cada una..

La biotina va unida a un linker que la separa de la superficie de la proteína, evitando posibles impedimentos estéricos con las regiones antigénicas presentes en la superficie de la proteína. De esta manera, la interacción con el anticuerpo no se verá comprometida con la conjugación.

Interacción entre un antígeno y la región Fab de un anticuerpo
Figura 2. Imagen 3D que muestra un antígeno (verde) interactuando con la región Fab específica del Ab (rosa) . La imagen también destaca ciertos aminoácidos (rojo) que suelen estar involucrados en los procedimientos de conjugación. Es importante tener en cuenta que algunos de estos aminoácidos son parte de la región del epítopo de la proteína. Si se produjera la conjugación con estos aminoácidos, podría interferir con el proceso de unión de Ab y, en última instancia, disminuir la capacidad antigénica de la proteína.

Al unir siempre una biotina por molécula de proteína, nuestras proteínas biotiniladas presentarán una mayor reproducibilidad y esto favorecerá a la reproducibilidad de los test de diagnóstico desarrollados con ellas.

Usos de las proteínas monobiotiniladas

Orientación de la proteína en placas recubiertas con estreptavidina
Orientación de la proteína en placas recubiertas con estreptavidina
Detección en ensayos de captura de IgMs
Detección en ensayos de captura de IgMs
Detección en ensayos DAS
Detección en ensayos DAS
Unión a oro y otras nanopartículas recubiertas con estreptavidina
Unión a oro y otras nanopartículas recubiertas con estreptavidina